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Als fünfter Teil der berühmten Open-World-Action-Adventure-Reihe setzt Assassin’s Creed III die Geschichte von Desmond Miles und seinen Vorfahren fort. In den vorherigen Teilen erlebte Desmond die Abenteuer von Altaïr und Ezio nach, zwei Assassinen-Vorfahren aus dem 12. bzw. 15. Jahrhundert. Durch ihre Geschichten erfuhren die Spieler, wie groß die Macht des Templerordens war – sowohl in der Vergangenheit durch ihren politischen und wirtschaftlichen Einfluss als auch in der Gegenwart durch Abstergo, ein Pharmaunternehmen, das als ihre Tarnung dient.
Im ersten Spiel wurde Desmond Miles vorgestellt, geboren 1987 und Sohn von Assassinen. Da er dem isolierten Leben der Assassinenbruderschaft entfliehen wollte, lief er als Teenager von zu Hause weg und versuchte, ein normales Leben zu führen. Sein Schicksal änderte sich, als er von einem Mitglied von Abstergo entdeckt wurde. Gefangen genommen und eingesperrt, wurde er gezwungen, den Animus zu benutzen, um die Erinnerungen seiner Vorfahren nachzuerleben. Als Altaïr während des Dritten Kreuzzugs deckte er die wahren Absichten der Templer auf: Sie suchen nach mächtigen Artefakten, um die Weltbevölkerung zu kontrollieren.
Im zweiten Teil gelingt es Desmond, aus Abstergo zu fliehen, und er schließt sich einer versteckten Assassinen-Basis an, die den Animus 2.0 nutzt. Als er erneut in die Maschine steigt, erlebt er das Leben von Ezio während der Renaissance nach. Verraten und von Rache getrieben, reist Ezio durch Städte wie Venedig und Rom. Unterwegs entdeckt er ein mächtiges Artefakt und erfährt, dass eine große Bedrohung über der Erde schwebt – eine, die zur Vernichtung der Menschheit führen könnte.
Assassin’s Creed III bildet den Höhepunkt dieser Handlung. Während sich der ewige Konflikt zwischen Assassinen und Templern verschärft, steht die Erde vor einer neuen Gefahr. Die Menschheit steht kurz vor der Vernichtung, und Desmond Miles, Sohn einer wichtigen Assassinen-Figur, muss sich seinem Schicksal im Kampf gegen Abstergo Industries stellen.
Mit Hilfe des Animus erlebt Desmond erneut das Leben von Connor Kenway, einem indianischen Vorfahren, dessen Mutter Indianerin und dessen Vater Engländer war. Die Geschichte spielt im Jahr 1775 und entfaltet sich während der amerikanischen Kolonialzeit und des Unabhängigkeitskrieges, angeführt von den dreizehn britischen Kolonien. Spieler treffen auf historische Persönlichkeiten wie George Washington, Benjamin Franklin und den Franzosen Gilbert du Motier, Marquis de Lafayette.
Du kannst Städte wie Boston und New York während Ereignissen wie dem Großen Brand von 1776 sowie andere wichtige Schauplätze der Zeit erkunden, wobei sich die Umgebungen im Laufe der Jahreszeiten verändern. Connor setzt neben seiner versteckten Klinge auch einen Bogen, eine Pistole und einen Tomahawk ein. Die Spieler werden riesige Gebiete entdecken, die es zu erkunden und in denen es zu jagen gilt. Das Spiel stellt nicht nur deine Fähigkeiten als Assassine auf die Probe, sondern auch deine Seemannskunst, da Seeschlachten Teil des Spielerlebnisses sind.